一、實驗背景

搖瓶培養：玻璃三角瓶內傳代培養，30ml搖瓶接種密度是：0.8×10E6 cells/ml，傳代時間兩天左右
搖瓶產量：密度每天倍翻，一般長到在4-6×10E6，30ml，最高長到6-8×10E6，表達量200-300ug/ml左右，擴大體積培養后蛋白產量下降。
二、培養條件（實際操作中的控制參數）
設備型號：BioWill™Lab-5L生物反應器             
細胞名稱（注明來源）：CHO工程細胞，自己轉染構建的
蛋白名稱（注明胞內或分泌）：一種融合蛋白，胞外分泌型
接種細胞數：0.8×10E6 cells/ml，1000ml
細胞生長期培養液（糖含量）：HyQ SFM4CHO，6.74g/L
接種后細胞維持培養液：
細胞生長期DO：50%                     
細胞生長期pH ： 7.2               
細胞生長期T：37℃                      表達期T：34℃
轉速度：60rpm
細胞培養期：  共6天
表達培養期：共4天
收獲體積：3L
三、簡述過程
   接種過程：準備好細胞種子密度為0.8×10E6 cells/ml，活率90%，1000ml打入接種瓶內，置于37度培養箱內。在層流罩連上接種瓶打入種子細胞，留少許檢菌，設置好參數，啟動自動運行狀態，每天根據細胞密度、殘糖量、滲透壓補加培養基、濃縮液和堿。
   表達過程：到后期，細胞密度和體積到達要求后，降溫轉表達。
四、培養的耗糖檢測：
 

 

耗糖曲線圖（附上曲線圖）：

 
五、蛋白表達檢測：
1、每天取樣后做ELISA檢測蛋白表達曲線如下

 
六、實驗總結與分析（實驗中出現的問題及解決方法）
1、細胞培養過程中每天取樣，觀察細胞狀態，檢測殘糖及滲透壓，計數及活率，根據細胞密度及耗糖補加培養基和濃縮液。細胞增殖正常，活率正常。
2、蛋白表達伴隨整個細胞生長過程，當活率低于80%時收獲下罐，以免其他代謝雜質增多不利于后期蛋白分離純化。
3、在生物反應器上擴大培養后，細胞達到體積大規模的同時密度明顯提高，且工藝參數（相比于搖瓶）控制更穩定，表達量也能明顯提高。
4、后期補加的培養基及濃縮包，由于配制放置時間過久，可能多肽及谷氨酰胺等營養物質有部分分解，導致影響后期細胞生長及蛋白表達，存在進一步優化工藝的空間。
七、客戶意見（針對產品或需要改進的地方）
1、滿意。
2、由于客戶工藝信息需要保密，部分數據刪除，本總結僅做工藝分析總結用。