細胞培養常見問題及回答
時間是：2021-10-15 06:25:00 點擊次數：401
細胞培養常見問題及回答
1. 谷氨酰胺在細胞培養中重要嗎？它在溶液中不穩定嗎？
L－谷氨酰胺在細胞培養時是重要的。脫掉氨基后，L－谷氨酰胺可作為培養細胞的能量來源、參與蛋白質的合成和核酸代謝。L－谷氨酰胺在溶液中經過一段時間后會降解，但是確切的降解率一直沒有最終確定。L－ 谷氨酰胺的降解導致氨的形成，而氨對于一些細胞具有毒性。
2. 什么培養基中可以省去加酚紅？
酚紅在培養基中被用來作為PH 值的指示劑：中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色。研究表明，酚紅可以模擬固醇類激素的作用（特別是雌激素）。為避免固醇類反應，培養細胞，尤其是哺乳類細胞時，用不加酚紅的培養基。由于酚紅干擾檢測，一些研究人員在做流式細胞檢測時，不使用加有酚紅的培養基。
3. 用臺盼蘭計數活細胞？
用無血清培養基把細胞懸液稀釋到 200－2000 個/毫升，在 0.1 毫升的細胞中加入 0.1 毫升的 0.4％的臺盼蘭溶液。輕輕混勻，數分鐘后，用血球計數板計數細胞?；罴毎懦馀_盼蘭，因而染成藍色的細胞是死細胞。
4. 消除組織培養的污染？
當重要的培養污染時，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母， 把污染細胞與其它細胞系隔離開，用實驗室消毒劑消毒培養器皿和超凈臺，檢查 HEPA 過濾器。
高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性，因而，做劑量反應實驗確定抗生素和抗霉菌素產生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如兩性霉素B 和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養污染的實驗步驟。
（1） 在無抗生素的培養基中消化、計數和稀釋細胞，稀釋到常規細胞傳代的濃度。
（2） 分散細胞懸液到多孔培養板中，或幾個小培養瓶中。在一個濃度梯度范圍內，把選擇抗生素加入到每一個孔中。例如，兩性霉素B 推薦下列濃度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0 mg/ml。
（3） 每天觀測細胞毒性指標，如脫落，出現空泡，匯合度下降和變圓。
（4） 確定抗生素毒性水平后，使用低于毒性濃度 2－3 倍濃度的抗生素的培養液培養細胞 2－3 代。
（5） 在無抗生素的培養基中培養細胞一代。
（6） 重復步驟 4。
（7） 在無抗生素的培養基中培養 4－6 代，確定污染是否以已被消除。
7. 為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會出現沉淀？
GIBICO 的胎牛血清 沒有預老化，儲存在 2－8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。這應該不會影響血清的質量。推薦在－20℃儲存胎牛血清，避免反復凍融。
8. 離子抑制胰蛋白酶活性嗎？使用胰蛋白酶時加入 EDTA 的目的是什么？ 二價離子的確抑制胰蛋白酶活性。EDTA 用來螯合游離的鎂離子和鈣離子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細胞前，用 EDTA 清洗細胞，以消除來自培養基中所有的二價離子。
10.胞培養的最適 PH 值和滲透壓是多少？
生長培養基的PH 值對細胞的增值和病毒或重組蛋白的生產均會產生影響。對于大部分鱗翅類昆蟲細胞系， 在 PH 值 6.0－6.4 范圍的大部分應用效果良好。培養鱗翅類昆蟲細胞系時，培養基的最適滲透壓是 345－
380mOsm/kg.。為保證可靠和持久的細胞培養方式，減少技術問題，保持 PH 值和滲透壓在以上所列的范圍之內。
